熒光PCR擴增試劑凍干方法及應用示例說明

隨著臨床醫學及生物診斷試劑的發展，為了滿足臨床需要，需要發明一種使用方面，不需要低溫保存及運輸的熒光PCR擴增試劑。

熒光PCr反應體系中含有熒光探針等試劑需要低溫保存及避免其化學性質發生變化，因此需要采用凍干的方法。說到熒光PCr擴增試劑的凍干，其實跟其他藥品或診斷試劑原理上沒什么區別。主要方法步驟包括。

1、配液。將熒光PCR擴增緩沖液，引物，探針，啟動酶等及凍干保護劑，按照配方進行混合配液。我們都知道凍干的藥物或診斷試劑，其中凍干保護劑包含賦型劑等的選擇非常重要。常見的凍干保護劑包括糖、多元醇類、聚合物、表面活性劑類、氨基酸類、鹽類等。而一種凍干試劑，通常是不是添加一種保護劑，而是多種保護劑連用。也就是我們這個試劑配方的摸索其實是相對來說zui耗時間，也是關鍵所在。如：熒光PCR擴增試劑的凍干添加甘油、海藻糖、牛血清蛋白，甲酰胺等。通常是多種一起用。

2、凍干。將上述凍干液體配制好，分裝到PCR擴增管或者八連管中。然后放入凍干機，開始進行整個凍干過程。對于凍干診斷試劑由于一般量很少，一個管內通常有50uL或者30ul，量很小，凍干工藝優化好的話，一般幾個小時就可以凍一批。如將分裝好的試劑放入凍干機中，在-35度預凍三小時。預凍完成后，凍干機內溫度不變，開始抽真空降到10pa處理兩個小時。2個小時升華結束后，真空狀態下將凍干機內部溫度升至10度，真空處理兩小時。真空狀態下繼續將凍干機內部溫度升至30度，處理兩小時。這樣整個凍干就完成了，整個過程9個小時，凍干完畢，蓋上擴征管或8連管蓋。通過這樣凍干的方法制備好的熒光PCR凍干粉，四季常溫避光保存，性質穩定，運輸方便，使用方便，使用時只需要添加溶解即可。

任何一種含熒光探針的PCR試劑或者其他試劑如果想通過凍干的方法獲得穩定的粉或者凍干微球，其實都是可以做成的，主要的是凍干配方的研究，對于凍干機選擇制藥用，工藝全的即可。

   以上醫療診斷凍干機系列，就可以用于診斷試劑、PCR熒光試劑的凍干、各種生物試劑及體外試劑均可以。